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        DNA定量之实时定量PCR(Real-Time PCR)

        浏览次数: 日期:2015年1月20日 15:42

               DNA定量试验最本质的目的是估计“可扩增”DNA的量。PCR扩增反应可能由于抑制物的存在、DNA高度降解、DNA量不够或者几方面的综合原因导致反应失败。所以,一种能准确反映样本中DNA质和量的试验方法对于下一步的检验是非常有益的。实时定量PCR就是这样一种方法,它的理论基础和检测形式将在第四章中进行具体讨论。
         
                人类个体识别检测已有多种实时PCR的检测方法(见D.N.A.解释3-3)。检测人类DNA和Y染色体DNA的实时PCR试剂盒均可买到(Applied Biosystems,2003)。
         


        D.N.A.解释3-3
        》基因组DNA的定量计算 
        重要换算公式:
        lbp= 618g/mol A:313 g/mol;T:304g/mol; AT碱基对=617g/mol
         
                    G:329g/mol;C:289g/mol;GC碱基对=618 g/mol
         
        1个基因组拷贝=~3 xl09bp =23染色体(一对中的一条)
        1摩尔=6. 02×l023分子数
        运用STR标记的标准的DNA分型检测通常需要Ing DNA模板。在Ing DNA模板中含有多少单个STR基因座的拷贝呢?
        1个基因组拷贝=(—3×l0(9)bp)×(618g.Mol(-1).Bp(-1))=1.85×l0(12 )g/mol 
        =(1. 85×l0(12)g/mol)×(1mOL/6. 02×l0(23)分子数)
        =3. 08 x10 -12g=3.08pg
        人类的一个双倍体细胞含有每条染色体的两个拷贝,则每个细胞含有~ 6pg基因组DNA。
        Ing基因组DNA(lOOOpg)=~每个基因座333个拷贝(双倍体的基因组为167个拷贝)

        所属类别: 样本采集

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