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        MVR-PCR序列多态性分析技术的基本原理

        浏览次数: 日期:2015年1月22日 14:43

            MVR序列的特点在于同一小卫星内重复单位的核苷酸序列存在着较大的差异。MVR-PCR利用PCR技术既检测小卫星因重复单位数不同产生的长度差异,又检测同一小卫星内重复单位碱基序列差异。以DYF155S1基因座变异的核心序列为例,图1显示了该基因座的结构概貌。个体的DYF155SI基因座由不同核心序列串联重复构成,图中例子为1型核心序列串联重复14次,后接一个4型核心序列。不同核心序列的区别表现在关键几处碱基的不同。      
         


        a:一个个体的DYF155S1 (MSYl)基因座由不同核心序列串联重复构成,图中例子为1型心序列串联重复14次,后接一个4型核心序列。
         
        b:不同核心序列的区别表现在关键几处碱基的不同,图中例子显示1~4型核心序列的区别是第3位C/T和第13位G/C的不同。
         
        c:显示MVR-PCR引物位置,正向分型(forward mapping)代表从5’端起始的分型;反向分型(reverse mapping)代表从在3’端起始分型。

        现在已经知道的DYF155S1基因座共有10种核心序列,每种核心序列长25bp,其序列的变异表现在3nt C/T,6nt T/C,13ntG/C,21nt T/A等几处碱基的不同(表2)。
         


             不同类型的核心序列在串联重复时,互相穿插的位置和次数不同,组成不同个体的不同模块结构(modular structure)。图3显示DYF155S1基因座不同个体的不同模块结构。左边代表5’端,右边代表3’端核心序列的阵列。不同类型核心序列的重复次数不同,不同个体DYF155S1基因座DNA片段的总长度也不同。采用不同的PCR引物,就可以揭示个体的MVR差异,实现个人识别。
         


            由于每一个体的MVR是由不同类型的核心序列组成的模块结构,MVR-PCR的分型策略如图5-14所示,在5’端分型称为正向分型,在3’端分型称为反向分型。由公共引物YIA+与引物TAG3可实现对5’端的3型核心序列(Type3) PCR扩增,由公共引物YIA+与引物TAG1可实现对5’端的1型核心序列(Typel) PCR扩增。由公共引物YIB+与引物TAG4R可实现对3’端的4型核心序列(Type4) PCR扩增,由公共引物YIB+与引物TAG3R可实现对3’端的3型核心序列(Type3) PCR扩增,由公共引物YIB+与引物TAGIR可实现对3’端的1型核心序列(Typel) PCR扩增。

        所属类别: 法医物证

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