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        聚合酶链式反应过程之PCR反应成分

        浏览次数: 日期:2015年1月22日 15:30

                PCR反应需要几种不同成分混合,再加入去离子水达到设定的体系和各成分的浓度。商业化的试剂盒已经预制了混合成分。法医DNA实验室可以方便的使用这些试剂盒。
                PCR反应中最重要的成分是一对引物,它们是短DNA序列,位于复制区域之前或侧翼。引物的作用是识别或标定模板DNA的复制区域。在PCR反应中使用与模板DNA相关的商业化高浓度寡核苷酸引物。为了设计适当的引物序列,需要掌握目标DNA序列的相关信息。
                PCR反应的其他成分包括:复制的模板DNA,构建核苷酸链所需的四种核苷酸,依据模板DNA序列构建核苷酸链的DNA聚合酶。各种成分和它们的优化浓度在表2中列出。在接近沸点的变性步骤中,热稳定性聚合酶不会被降解,这对于PCR反应的成功十分重要(Saiki et a1.,1988)。最常见的热稳定性聚合酶是Taq,它源于生活在温泉的Thermus aquaticus细菌。
         表2常规PCR扩增成分
         


                当用相同引物和反应成分进行多个样本实验时,通常会制备“主混合液”,等量分装到每一个PCR管。这一过程确保了样本间的一致性。在一次设立大量反应时,也就避免小体积吸取,可提高加入的每一成分的精确度(方法的再现性)。当针对大量不同样本做常规实验,检测目标是揭示样本DNA的差异而不是揭示反应成分和样本准备方法的差异。

        所属类别: 扩增技术

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