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        DNA的提取之固相提取法

        浏览次数: 日期:2015年1月22日 15:44

               DNA的固相提取法是近几年才发展起来的高通量DNA提取方法。这一领域最多见的就是以硅珠为基础的提取方法和QIAGEN公司的产品(Valencia,CA)。QIAamp离心柱也是一种有效的DNA分离方法(Greenspoon et al.,1998)。在这种方法中,核酸在高浓度高离液盐例如氢氯酸胍、硫氢酸胍、碘化钠和高氯酸钠( Vogelstein and Gillespie,1979;Boom et al.,1990; Duncan et al.,2003)环境中,选择性地吸附在类似玻璃珠的硅支持物上。这些高离液盐可破坏液态水中的氢键网络,使变性的蛋白质和核酸,比其在折叠或配对结构的情况下更具有热力学的稳定性( Tereba et a1.,2004)。
               如果溶液的pH小于7.5,通常95%的DNA可吸附在硅珠上,不需要的杂质就可以被洗去。在碱性和低盐的情况下,DNA可从硅珠上有效洗脱。这种固相提取法可在单管或96孔板上用离心或真空转移的方法完成( Hanselle et al.,2003;Yasuda et al.,2003),甚至可用于微芯片( Wolfe et a1.,2002)。

        另一种固相提取方法是Promega公司的DNA  IQ(TM)系统。DNA IQ(TM)系统和QIAGEN试剂盒使用相同的硅珠DNA结合和洗脱化学物质,而使用的硅包被的顺磁性树脂不同(Tere-ba et al.,2004)。应用这种方法,只是简单地在单管中加入和移去溶液即可实现DNA的分离。首先,DNA分子在pH小于7.5的溶液中可逆性地结合在溶液中的磁珠上。用磁力架将硅包被的磁珠吸附到管的底部或壁上而让杂质留在溶液中。这些溶液中的杂质(蛋白质、细胞碎片等)随清除磁珠以外的液体而清除。这些带有DNA的磁珠应多次清洗以便得到较纯净的DNA。最后,通过加热数分钟将相当数量的DNA释放到洗脱液中。

               用这种方法所获得DNA的量与所用磁珠的数量和吸附力有关。因为无需经过真空转移或离心,磁珠法成为简单、快捷、自动化的方法。这种提取方法在Beckman 2000工作站实现了自动化,在弗吉尼亚的法庭科学实验室中应用于实际检案( Greenspoon et al.,2004)。

        所属类别: 样本采集

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